高效液相色谱仪是在经典液相柱色谱仪的基础上

2020-04-19 10:52 来源:未知

上述仪器条件的设置,在有些仪器上是不需要的,因为由于计算机的发展和普遍应用,很多仪器的坐标设置,完全由仪器的计算机自动设置。

1台

7、激活操作方法,等待仪器平衡、基线平直

(3)用户目前特别关注的新型检测器:质谱检测器、化学发光检测器、放射性检测器、光电导检测器、旋光检测器、电喷雾检测器(最新的质量检测器,后面还将详细讨论)等等。

4.采用面板触摸开关,不须繁琐的功能调整,自动调零。

3、进入仪器工作站,联机并设定仪器使用方法及仪器参数

3)上海伍丰推出了第三代lc-100液相色谱仪

水相溶剂过滤膜

高效液相色谱法(HPLC)是目前应用广泛的分离、分析、纯化有机化合物(包括能通过化学反应转变为有机化合物的无机物)的有效方法之一。

高压泵的质量直接影响整个hplc的质量,是用户关注的核心部件之一。hplc高压泵的重要性及使用者对高压泵的具体要求如下:

高效液相色谱仪 型号:HAD-C2900

5、检查是否漏夜、柱压是否正常

hplc仪器的进展发展很快,远不止如上所述。因篇幅所限,此不赘述。

主要技术指标:

高效液相色谱仪的操作步骤:

hplc的色谱柱主体组成(结构)如下:

清单

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要用好、保护好色谱柱,是一个需要特别重视的问题,如果稍有不慎,就有可能降低色谱柱的柱效、缩短色谱柱的寿命,甚至损坏色谱柱。

双泵梯度高效液色谱仪

2、打开主机、预热

3、检测系统

1.微机控制通过键盘设定各种参数,并由液晶屏幕显示各种参数,操作简便醒目。

高效液相色谱仪是在经典液相柱色谱仪的基础上,引入了气相色谱仪的理论,采用了高压输液泵、高效固定相、梯度洗脱技术和高灵敏度检测器,具有高压、高速、高效、高灵敏度、高选择性和应用范围广等特点。

具体操作方法如下:

名称

1、打开电脑

李昌厚,男,中国科学院上海生物工程研究中心原仪器分析室主任、兼生命科学仪器及其应用研究室主任、教授、博士生导师、华东理工大学兼职教授;终身享受国务院政府特殊津贴。

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6、设置仪器方法,包括仪器的使用条件等

高效微流电色谱仪为国家科技部“十二五”重大攻关项目,是国际首创的一种新型hplc仪器;在柱效、分离速度等很多方面都优于uplc,其柱效比uplc高10倍、5秒钟可以分离5个芳香烃(一般hplc需要10-20秒)。该仪器总体优于uplc,又是一个国际首创。定量毛细管电泳仪也是国际首创(一般毛细管电泳仪,定量分析精度很差)。

泵的密封性: 压力为30MPa,时间为10min,压降不大于0.5Mpa

技术指标LC-P310高压恒流泵基本技术指标:流量范围:0.001~9.999mL/min流量稳定性误差:Sr≤±0.3% RSD±0.06%流量设定值误差:Ss≤±0.5%压力线性和准确度:显示压力误差≤±0.5Mpa压力脉动:≤0.1 MPa泵的密封性压力:42MPa,时间为10min,压力降0.5Mpa最高工作压力:42MPa(0.001~9.999mL/min)外形尺寸:450mm×300mm×160mm (长×宽×高)LC-UV310紫外检测器基本技术指标:波长范围:190-680nm光谱带宽:8nm波长示值误差:≤±1nm波长重复性优于0.1um基线噪音:≤2×10-5AU基线漂移:≤2×10-4AU最小检测量:1×10-8g/ mL外形尺寸:450mm×300mm×160mm (长×宽×高)标准配置LC310标准等度配置LC-P310高压恒流泵 :1台LC-UV 310紫外检测器 :1台LC-CO310色谱柱温箱 :1台7725i手动进样阀: 1套LC-WS310色谱管理工作站 :1台液相色谱柱 :1支LC310标准梯度配置LC-P310高压恒流泵 :2台高压混合器:1套LC-UV 310紫外检测器: 1台LC-CO310色谱柱温箱: 1台7725i手动进样阀: 1套LC-WS310色谱管理工作站: 1台液相色谱柱 :1支可选配置液相平头微量进样针溶剂过滤器品牌电脑品牌打印机稳压电源应用领域智能全控液相色谱仪LC310适用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定易分解的、分子量大、极性不同的有机化合物;生物活性物质和多种天然产物;合成和天然的高分子化合物等。在自然界中,80%的有机物都可以用液相色谱系统进行分析和检测。该系统主要应用于食品安全、药物分析、环境保护以及卫生防疫、农业、林业、渔业、畜牧业、制造业、石油化工、质量监督、教学研究、水利系统等领域。

冷态开机,预热30分钟,设恒流泵的流速1ml/min;检测器设置:仪器调整到最灵敏度档(如:0.005aufs;即纵坐标设置为0.005au);波长λ=250nm(有人设置500 nm,但最好测试250 nm)、0 abs(即时间扫描,吸光度和时间都从0点开始测试),光谱带宽(sbw)=2nm(固定光谱带宽的仪器不能选择),连续测试1小时,可以用仪器上的crt指示噪声在这1小时里,任取10分钟(包含最差的峰-峰值),在这10分钟里取峰对峰值(p-t0-p)的最大值,就是仪器的噪声。但是,10分钟里的峰对峰(p-t0-p)值,不同于10分钟里的任一地方的峰-峰(p-p)值,即:“10分钟里的峰对峰”值,不等于瞬时的峰-峰(p-p)值。测试数据前面应加“±”符号。目前,国际上基本上采用这种方法测试hplc仪器的动态噪声。有时候,为了节省时间,也可以在漂移测试的基础上检测噪声。但是开机时间就不是30分钟,而是2小时。这样所得测试数据稍小于开机30分钟的数据(因此,给出数据时要说明方法),数据处理方法仍如上所述。

超声波清洗器

9、操作测试结束后,清理所有实验材料,做好清洁卫生

(4) 流量重复性好

2.双光路、光纤传输光学系统,最大程度地减少噪声和漂移,允许工作至0.01AU。

8、仪器出现“Ready”后可进行样品分析

注意:噪声测试时,国际接轨的做法是在500nm。但是有些厂商却给出700nm处测试的噪声,这也是不对的。因为波长短,能量大;500nm处的能量比700nm处大,所以在700nm处测试的噪声,数据会偏小,数据不真实。

光谱带宽: 8nm

4、启动泵的动力系统预处理(排气等)

注意:开机30分钟后,仪器调整到最灵敏度档(如:对量程为0.005-3.0aufs的仪器,取0.005aufs,即纵坐标设置为0.005a);设置波长λ=250nm(有人设置500 nm,但最好测试250 nm);设置0 abs(即时间扫描,吸光度从0点开始测试);光谱带宽(sbw)=2nm(固定光谱带宽的仪器不需选择)。

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在已知的有机化合物中,约有80%能用高效液相色谱法分离、分析,而且由于此法条件温和,不破坏样品,因此特别适合高沸点、难气化挥发、热稳定性差的有机化合物和生命物质。

目前,国内外许多制造商都用萘或者蒽来测试hplc系统的灵敏度,这种做法也可以,但是从仪器学理论角度考量,作者认为不科学。因为:①、不能给出仪器的测量范围,只能给出萘的最小检测浓度;②、试样的配制会带来很多误差;③、这种方法所作的测试,实际上是计算出来的灵敏度,而不是测试出来的真正的灵敏度,不能反应仪器真正的灵敏度。如果实际测试,肯定比计算的数据大很多。④、不与国际接轨,不便比较不同仪器的性能。虽说近几年国内外采用此方法的科技工作者比过去多,但是不能掩盖方法的局限性。所以,最好的方法还是给出仪器的测量范围。

最高工作压力: 42MPa

10、记录仪器使用日志,并与管理员办理交接手续

(四)hplc仪器的最新进展

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3) 李昌厚著,紫外可见分光光度计仪器及其应用,北京:化学工业出版社,2010

1盒

这里包括仪器的静态基线漂移和动态基线漂移的测试方法:

针式滤器

2、没有理论指导的仪器研发和生产工作都是闭着眼睛抓麻雀,一定要重视仪器学理论;

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目前,国际上对hplc的uvd的量程范围设计指标,一般在0.005-3.0aufs内。作者在研制hplc的uvd检测器时,用原上海大华仪表厂生产的xwt-204记录仪的1v档测试。当对数放大器的差分放大器的总输出为1v时,记录仪满度(100格)。当仪器的有效光电信号从0.005-3.0v时,均可保证对数放大器的输出为1v;此时,这个0.005-3.0v对应的吸光度为0.005-3.0abs。要求从0.005-3.0abs时,光度准确度都能保证在1%以内(即1v±10mv)。如此测量3次并取均值,即是hplc的量程范围(0.005-3.aufs)。

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工作原理图如下图所示:

显示方式: LED数字

hplc一般都是由输液系统(泵) 、进样系统 、 分离系统(柱)、检测系统、数据处理系统组成。各部分简述如下:

波长范围:190-700nm

(5)噪声:非常重要,一般光谱仪器有多大的噪声,就可能在测试结果中增加多大的误差。

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2)最常用hplc检测器的类型

最小检测量: 4×10-8g/mL(萘的甲醇溶液)

米高梅娱乐场 ,目前,国内外很多hplc仪器的uvd生产厂商不给仪器的量程,这是不妥的。因为,不给量程范围就意味着不知道检测器的灵敏度(下限),不知道多少吸光度时仪器能达到满度。当然,目前有很多hplc仪器的uvd生产厂商,给出了仪器对某一物质的最小检测浓度或最小检测量,这在某种程度上也可以反映仪器的灵敏度,并且对使用者来说,比较方便、比较直观。但是,这种表示方法只是对某一物质而言,特别是会带来样品处理产生的误差、容易低估仪器噪声的影响,因此,从仪器学理论的角度来看是不科学的。

主要技术指标:

有些仪器采用软件平滑噪声,作者认为不是好办法。因为平滑时一是信号也损失了一部分,二是硬件的噪声并没有去掉。测试结果表面上噪声小了,其实信噪比没有变化。所以,作者认为应该从算法上着手,采用目前国际上一种最先进的利用软件、算法降噪技术,这种技术只降噪声,不影响信号,这是光谱仪器研发工作者应该重视的问题。

压力脉动: 0.1MPa (流量为1mL/min, 压力8.5MPa条件下)

(7) 具有梯度洗脱功能

1套

5)这里特别需要提出的是:目前有些国外hplc生产厂商,为了吸引用户,制造了一些违背仪器学理论的指标。例如:国外某厂商,在招标中给出hplc的噪声时,先采用计算机对噪声进行平滑,并且采用最大量程测试,结果给出的hplc噪声非常小、谱图基线非常平直、谱峰尖而陡直,给人的印象是世界一流的hplc。其实不然,给出的数据和谱图都是虚假的。如果用盲样进行比对测试,因为他们的hplc的噪声大,信噪比差,灵敏度差,所以立即败下阵来。

流量准确度: ≤2%

1)定义

流量精确度: ≤1%

3)光学类检测器的主要技术指标:

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1)光学类检测器基本功能:提供准确的波长、提供足够小的检测限(灵敏度,这是用户最关心的问题之一)、提供小的噪声、飘移和重复性,给出最终检测结果。

5.可作单泵恒流输出亦可双泵构成梯度淋洗。

高压泵是关键部件之一,按原理分为两种类型:一类是恒流泵,一类是恒压泵。恒流泵,无论色谱柱的阻力如何变化、无论外界有何影响,它输出的流动相的流速可以基本保持不变,这正好是hplc系统工作的基本要求;而恒压泵输出的基本上是恒定不变的压力,在正常情况下,由于hplc系统的阻力不会变化,所以恒压也可以达到恒流的效果。但是由于色谱柱、温度等可能会有变化,所以可能导致流量变化,这是hplc使用者不希望看到的结果。所以一般来讲,恒流泵比恒压泵好(横流泵的使用多于恒压泵)。目前我国有近20家企业在生产各种不同类型的hplc,但是基本上都是采用恒流泵;例如:北京普析公司的l600系列、北京东西电子的lc-5510、 北京瑞利公司的sy-8100 、大连依利特公司的5100、上海伍丰公司的lc100、上海仪电公司的lc210、浙江福立公司的lc1190等等仪器都是采用的高压恒流泵输液。

1.先进的全息凹面光栅的单色仪结构,使本仪器具有较高的灵敏度。

1、灵敏度的测试方法

有机相溶剂过滤膜

讲hplc的指标、给出hplc的谱图,应该实事求是的给出使用的灵敏度量程(一般使用最灵敏量程),给出样品浓度(一般是噪声的3倍左右),才能说明仪器的检测限或灵敏度。

流量范围: 0.001-9.999 (ml/min)

(一)hplc仪器工作原理、结构组成

基线漂移: ≤1.0×10-3AU/h

4、新型的电喷雾检测器的问世,它是最新的质量检测器之一,其工作原理如下图:

波长精度: ±1.0nm

(3)其它色谱柱 (手性柱, 离子交换柱): 约占10%左右。

数量

1、二维及多维液相色谱仪的发展:美国eksigent公司和日本kya tech公司生产的纳升级二维高效液相色谱仪,其组合了纳米微柱和二维液相色谱技术,可直接用于蛋白质组学、基因组学研究工作中。

流通池体积: 8ul

1)李昌厚著,高效液相色谱仪器及其应用,北京:科学出版社,2014

含2910型微机宝石恒泵2台、2930紫外分光检测器1台、9810六通进样阀1只、C18-250mm*4.6色谱柱1根

输液高压泵的稳定性和脉动大小会直接影响hplc系统的稳定性(漂移和重复性)、影响系统的噪声、降低灵敏度,特别是hplc系统采用电化学检测器和示差等检测器,或进行梯度分离时更加重要,因此目前国际上很多高压泵的压力脉动都可以控制在1%以内。

1000ml

(2)还有目前使用非常多的、质量型检测器:蒸发光散射检测器--elsd, (已上药典,可以替代rid)。

4.仪器具有过压保护和断电保护功能,并设有自诊断程序。

2)色谱柱分类:

型号规格

(五)几个有关问题

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耐高压是hplc系统对高压泵的基本要求之一,一般来讲,平均粒径为4µm左右的填料、内径为5mm左右的色谱柱,当流动相流速为1-3ml/min时,要求输液泵的最高工作压力达到34.47-41.36mpa(5000-6000psi)目前国际上商品hplc泵的最高工作压力一般为41.36mpa (5000psi)左右。但随着填料粒径的不断减小,粒径为1-2.5µm范围的小粒径无孔色谱填料的应用推广,流动相在色谱柱中的阻力会更大,所以,2004年国际上出现了超高压液相色谱,要求输液泵能够耐更高的压力。目前市场上已有达到68.94mpa(10000psi)的高压恒流泵(如:altex 100a)。

序号

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